HPLC的日常維護和使用注意事項

HPLC以它定量分析結果準確、分析周期短、分析範圍廣及分析檢測限低等優(you) 勢，在食品添加劑、藥物成分分析等多領域得到了廣泛的應用。本文就液相色譜儀(yi) 在實際操作時應注意的事項及維護做了簡單介紹。

　　主要部件介紹

　　輸液係統

　　輸液係統主要包括在線脫氣裝置、高壓輸液泵、梯度洗脫裝置。在線脫氣裝置主要功能是流動相在進入柱子前排除氣泡。液相色譜柱的填料顆粒小，通過 2~5 mm 的色譜柱受到的流動阻力很大，因此需要通過高壓輸液泵抽取流動相輸送至色譜柱。

　　高壓泵按輸液性能可分為(wei) 恒壓、恒流泵。按機械結構可分為(wei) ：液壓隔膜泵、氣動放大泵、螺旋注射泵和往複柱塞泵。

　　進樣器

　　進樣器是將分析樣品送入色譜柱的裝置，分為(wei) 手動、自動進樣器兩(liang) 種。手動進樣器一般配有20~100μL的定量環。

　　色譜柱

　　色譜柱以液體(ti) 為(wei) 流動相，以廣義(yi) 的固相為(wei) 固定相來進行分析樣品的分離工作。

　　色譜柱按照分離模式大致可以分為(wei) 正相色譜柱和反相色譜柱。

　　檢測器

　　檢測器是將色譜柱分離出樣品的物理或化學特性轉換為(wei) 可以測量的電信號，通過色譜圖記錄下來，由色譜圖中的峰形狀判斷分離效果，依據標物、分析樣色譜圖的出峰時間、峰麵積分別對樣品進行定性定量分析。

　　維護及使用注意事項

　　1.開關(guan) 機操作注意

　　分析準備工作做好後，依次打開穩壓電源、高壓輸液泵、柱溫箱、檢測器，待各部件自檢結束，打開連接儀(yi) 器的電腦，啟動工作軟件。分析工作結束後，關(guan) 閉工作軟件，再依次關(guan) 閉檢測器、柱溫箱和高壓輸液泵。

　　2.對流動相的要求

　　為(wei) 保證液相色譜儀(yi) 器的正常使用，所有流動相必須是色譜級的，且經過過濾雜質、排除氣泡後裝入幹淨的流動相貯存瓶中待用。

　　(1)流動相的物理化學性能要求

　　對分析物要有足夠的溶解能力，以利於(yu) 提高檢驗的靈敏度;流動相的黏度要小，以保證合適的柱降壓;流動相的沸點要低，以利於(yu) 製備分離時樣品的回收;流動相的 PH 值一般應在 2~7.5;使用期限不得超過 2 天，否則產(chan) 生細菌汙染管路。

　　(2)流動相的過濾

　　流動相在使用前都必須經過濾，以除去雜質微粒。同時要定期清洗吸濾頭，以防雜質通過其進入流動相。應依據其是否是水溶性選擇水膜或有機膜(0.45 μm 或 0.22 μm)，使用溶劑過濾裝置，通過真空泵抽氣過濾。

　　(3)流動相的脫氣

　　流動相必須預先脫氣，否則易產(chan) 生氣泡，影響泵的工作。此外，溶解在流動相中的氧能與(yu) 某些有機溶劑形成有紫外吸收的絡合物，提高背景吸收，會(hui) 在梯度洗脫時造成基線漂移或形成鬼峰。常有的脫氣方法有在線真空脫氣法、超聲波脫氣法、抽真空脫氣法三種。

　　3.色譜柱的維護及使用注意事項

　　所有分析樣品把pH值調節到適合色譜柱的pH值範圍內(nei) 。進樣要避免超負荷，這是保持色譜柱性能持久良好的重要方法之一。手動進樣器進樣的話，進樣時動作要快速準確。分析物成分複雜時，要在色譜柱前加色譜保護柱以保護色譜柱。每次分析工作開始時，要對色譜柱進行平衡，用含10%流動相中的有機溶劑的水溶液進行排氣和衝(chong) 洗色譜柱和管路，衝(chong) 洗30分鍾左右，將色譜柱中的純有機溶劑替換掉，然後再用至少10倍柱體(ti) 積的流動相平衡色譜柱，直至基線平衡後方可進樣。

　　每次分析工作結束後，一定要立即用一定量的水溶液*衝(chong) 洗色譜柱中的緩衝(chong) 鹽液，再用對被測物洗脫能力強的溶劑來衝(chong) 洗色譜柱，衝(chong) 洗時間不能小於(yu) 1小時，洗脫溶劑的用量至少為(wei) 柱體(ti) 積的20倍。若不及時衝(chong) 洗色譜柱，雜質長時間積累在其中，易堵塞色譜柱，降低柱效性能。長期這樣，會(hui) 加速減少色譜柱使用壽命。色譜柱4天以上不使用，應從(cong) 儀(yi) 器上取下，用封頭螺帽把兩(liang) 頭緊緊密封。色譜柱保存時注意不要強烈震動、碰撞。

　　4.高壓輸液泵的維護及使用注意事項

　　每次分析工作結束後，都應及時清洗泵。當有緩衝(chong) 鹽做流動相時，緩衝(chong) 鹽與(yu) 有機溶劑互相交換前一定要用5%的甲醇水溶液清洗泵，防止鹽在有機相中結晶損壞泵中各組件。緩衝(chong) 鹽溶液的濃度不要過高，要控製在5%以下，否則高濃度的緩衝(chong) 鹽會(hui) 磨損密封墊和活塞，降低其使用壽命。長時間使用高濃度的緩衝(chong) 鹽，必須用10%的異丙醇色譜級溶液清洗泵，從(cong) 而保護柱塞和密封墊。

　　輸液泵工作前要設置工作壓力範圍，正常工作壓力一般不要超過 30 Mpa，否則經常高壓會(hui) 使密封環變形，產(chan) 生漏液。平時分析工作要養(yang) 成記錄壓力的好習(xi) 慣，這樣如果工作壓力超過平時正常壓力的10%~15%，就應及時查找原因。

　　5.紫外檢測器的維護及使用注意事項

　　紫外檢測器有一定的使用壽命，所以平時應盡量減少氘燈的使用時間，在柱平衡進行一大半之後，在走基線之前，打開檢測器光源;分析結束後即可關(guan) 閉檢測器光源。要保持檢測器四周環境清潔，實驗室盡量少開窗戶，定期地麵進行吸塵工作，防止檢測器工作時由於(yu) 靜電吸附灰塵顆粒覆蓋在光學元件上。檢測器池內(nei) 存在氣泡就會(hui) 產(chan) 生噪音，噪音會(hui) 幹擾定量分析，所以流動相須充分脫氣後再使用。

　　應定期清洗流通池。如觀察到流通池內(nei) 部無氣泡或髒物，應清洗流通池。通過注射器用異丙醇等有機溶劑衝(chong) 洗池內(nei) ，以清洗透鏡。如是含有緩衝(chong) 鹽的溶劑作流動相，應在使用異丙醇衝(chong) 洗前用水替換池中原先有的溶劑。