液相色譜儀的維護與保養

根據液相色譜儀(yi) 的硬件組成模塊，按照流動相經過的順序：流動相溶劑瓶→高壓泵→進樣器→色譜柱→檢測器→廢液。逐步闡述高效液相色譜儀(yi) 在日常使用中正確的維護及相關(guan) 的注意事項。

1.流動相溶劑瓶

溶劑瓶是流動相的起點，通常是盛放水相溶液或是有機相溶液。

1. 水相溶液

對於(yu) 水相溶液來說，首要的問題是防止汙染。雖然液相用的水大都經過殺菌處理，但是細菌的生命力很頑強，在適當的溫度和光照情況下，它們(men) 就會(hui) 活躍起來，如果在流動相裏加入磷酸鹽一類的添加劑，它們(men) 更是如虎添翼。所以，對於(yu) 溶劑瓶我們(men) 要做的非常重要的工作就是勤換流動相，常換常新。

2. 有機相溶液

對於(yu) 有機相溶液，可以不用擔心細菌繁殖的問題。但是有機相容易發生聚合，特別是乙腈在適宜的光照條件下極易發生聚合，瓶子裏就會(hui) 出現一些絮狀的聚合沉澱物。為(wei) 了防止聚合過程的發生，裝乙腈時要用棕色的溶劑瓶，避免陽光直射，更換乙腈時應當棄去瓶底剩餘(yu) 的溶液。

3. 清洗過濾

溶劑瓶裏的過濾頭，其作用是為(wei) 了防止溶液瓶中的顆粒雜質進入到儀(yi) 器的流路係統中，它的材質通常分為(wei) 玻璃燒結石英和不鏽鋼，如果不慎堵塞會(hui) 造成流動相吸液不暢，因此必須進行清洗，玻璃材質的通常是用稀硝酸泡，而不鏽鋼材質的可以直接進行超聲清洗。

4. 流動相的脫氣

脫氣的目的是為(wei) 了除去流動相中溶解的氣體(ti) ，使色譜泵的輸液準確，保留時間和色譜峰麵積再現性提高;使基線穩定，信噪比增加，防止氣泡引起尖峰，從(cong) 而提高檢測器性能;減少死體(ti) 積，防止填料氧化，從(cong) 而保護色譜柱。目前常用的脫氣方法有以下4種。

(1) 氦氣脫氣法:利用液體(ti) 中氦氣的溶解度比空氣低，連續吹氦脫氣，效果較好，但成本高；

(2) 加熱回流法:效果較好，但操作複雜，且有毒性揮發汙染；

(3) 真空脫氣法:易抽走有機相；

(4) 超聲脫氣法:流動相放在超聲波容器中，用超聲波振蕩10～15min，此方法效果較差，但操作簡單。實際工作中，超聲脫氣法操作簡單，仍被廣泛應用，雖然此方法有時會(hui) 引起氣體(ti) 溶解度的增加，但基本上能滿足日常分析操作的要求。

2.高壓泵的保養(yang)

泵是液相色譜的核心，泵將流動相從(cong) 溶劑瓶輸送到液相流路係統中，並要在高壓下保持流量和壓力的穩定。狀態正常的高壓泵是液相色譜準確分析的基礎，所以平日一定要重視對泵的維護。

很多情況下，泵的問題反映在壓力上，壓力波動又是常見的一類問題。泵正常的壓力波動通常會(hui) 在2%以內(nei) ，且平穩規律;不正常的波動通常由氣泡和鹽造成。如果流動相中的氣泡沒有被脫氣機除掉而到了泵以後，就會(hui) 造成壓力波動，通常我們(men) 可以通過重新清洗(purge)流路和再次脫氣流動相加以解決(jue) 。

由鹽造成的波動主要是因為(wei) 流動相中加入了濃度較高的緩衝(chong) 鹽，在含鹽流動相與(yu) 有機相混合的時候，鹽會(hui) 有微小的析出，從(cong) 而導致壓力異常波動，解決(jue) 這類問題可以考慮適當降低鹽的濃度。如果一定要用到此類流動相，可以考慮在有機相中加入一定比例的水，然後適當提高梯度結束的終點。

3.進樣器的保養(yang)

進樣器分手動和自動兩(liang) 大類，雖然兩(liang) 者工作模式不同，但使用的要點是基本一致的。

1. 防止交叉汙染

自動進樣器比較常見的問題是交叉汙染，交叉汙染產(chan) 生的原因很直接，樣品殘留在進樣針內(nei) 外表麵，並隨下一次進樣進入色譜係統。要解決(jue) 交叉汙染，主要靠清洗。自動進樣器都會(hui) 有洗針的功能，如果樣品濃度較高或者是吸附性比較強，一定要打開此功能；如果未打開洗針功能，汙染可能已經殘留在了針座或流通閥上，那麽(me) 這兩(liang) 個(ge) 部件需及時超聲清洗。

出現在自動進樣器上的另外一個(ge) 問題是峰麵積重現性差，考慮可能與(yu) 自動進樣器吸取樣品有關(guan) 。首先觀察樣品的液麵是不是足夠高，以保證進樣器可以吸到樣品。排除這個(ge) 問題後，再察看自動進樣器的設置，對於(yu) 一些粘度大的樣品，要降低自動進樣器的吸取速度。

2. 精細操作

手動進樣器的操作要點大致相同，應使用液相色譜儀(yi) 平頭進樣針，進樣時插針應插到底，不使用時將針頭留在進樣器內(nei) ，使用前後都要及時清洗。

4.色譜柱的保養(yang)

色譜柱是化合物分離的關(guan) 鍵。保養(yang) 良好的色譜柱具有很高的塔板數，且儀(yi) 器基線平穩。色譜柱一般比較昂貴，在平時的工作中要注意以下幾個(ge) 事項：

(1) 色譜柱不能夠碰撞、彎曲或強烈振蕩。安裝時要保證閥件或管路的清潔；

(2) 流動相在使用前必須進行脫氣處理，盡量不使用或少使用高粘度的流動相；

(3) 在滿足靈敏度的情況下，盡可能使用小進樣量。如果樣品比較“髒”，要進行淨化或提純處理；

(4) 分析結束後，要清洗進樣閥中殘留的樣品，並用流動相或適當的溶劑清洗色譜柱；

(5) 如色譜柱長期不用，應該用適當的有機溶劑保存並封閉或定期給柱子補充合適的流動相。對於(yu) 反相柱可以儲(chu) 存於(yu) 純甲醇或乙腈中，正相柱可以存放於(yu) 嚴(yan) 格脫水後的純正己烷中，離子交換柱可以儲(chu) 存於(yu) 水中。

5、檢測器的保養(yang)

目前市場上檢測器的種類繁多，而且各有特性。以常用的紫外(VWD)/二極管陣列(DAD)檢測器來說，這兩(liang) 類都是紫外類的檢測器，雖然光路設計不同，但是本質原理都是相同的。

1. 光源部分

檢測器中非常重要的部件是光源，光源對發射能量有要求，一旦能量衰減到一定程度，就會(hui) 出現基線噪聲變大，靈敏度降低等一係列影響使用的問題，因此光源是一個(ge) 消耗品。通常紫外燈的壽命是2000h，當到達這個(ge) 時限的時候，我們(men) 就要特別關(guan) 注燈的能量狀況，可以通過儀(yi) 器維護軟件中自帶的“燈能量測試”功能來判斷，測試的結果會(hui) 分別評估低、中、高三個(ge) 波長段的能量，一旦某個(ge) 波長段的測試結果顯示失敗，就表示需要更換燈。

2. 檢測池

檢測器中另一個(ge) 重要部件是檢測池，也叫流通池。通常大家關(guan) 心的一個(ge) 問題是檢測池被堵掉，因為(wei) 檢測池通常不是很耐壓，所以一旦被堵就很可能造成損壞。事實上檢測池通常不太容易被堵，原因是幾乎所有的顆粒雜質都會(hui) 被色譜柱攔下了，所以堵塞檢測器的東(dong) 西基本都不是來自樣品的，很可能是後來“產(chan) 生”的，比如含鹽流動相殘留在檢測池中導致鹽析出。

6 廢液的處置

液相色譜儀(yi) 的廢液大部分含有有機溶劑，會(hui) 對人體(ti) 產(chan) 生一定的危害，對環境也會(hui) 產(chan) 生汙染，嚴(yan) 禁隨意傾(qing) 倒，應及時處理。目前，國內(nei) 大部分實驗室是將廢液送到專(zhuan) 門的廢液處理站集中進行無害化處理。