冷凍切片機的使用方式以及注意事項

　　組織切片技術是醫學和生命科學領域中的重要技術，主要有石蠟切片、震動切片和冰凍切片等技術。其中冰凍切片技術的應用越來越廣泛，其優點就是快速、便捷，且能較完整的保存抗原活性，如細胞的某些抗原成分，特別細胞膜抗原，受體抗原，酶及肽類抗原在石蠟切片的處理過程中，不可避免的受到破壞或失去抗原活性，而且對於原位分子雜交等核酸探針雜交實驗，冰凍切片技術也成為切片技術。

　　儀器的操作係統主要由總開關、操縱麵板1、操縱麵板2、手輪和冷凍箱組成。總開關控製儀器的供電，儀器開機運行後，無特殊原因不要關閉總開關，若由於斷電或其他原因關閉總電源後，則必須要對冷凍箱及其附件進行除菌和幹燥處理後才能重新啟動儀器。

　　2 操縱麵板1主要控製冷凍箱照明、溫度、除霜、時間設定等功能，並顯示切片厚度、切片模式等信息。

　　溫度調節包括箱體溫度(CT)和樣品頭溫度(OT)，OT溫度設定可比CT略高。不同的組織選用不同的溫度進行切片，過高或過低的溫度均會影響切片的質量，表1中是一些常用組織的參考切片溫度，具體采用的溫度還需操作者在實踐中進行摸索。除霜是冰凍切片機每天均需進行的操作，用於除去儀器運行過程中，箱體內部產生的霜。LeicaCM3050S具有三種除霜模式：箱體自動除霜、箱體手動除霜和樣品頭手動除霜模式。箱體自動除霜每24小時自動進行一次，具體時間可以人為設定(最好設定在00:00左右)，除霜結束後儀器自動降溫到設定值。自動除霜時程的默認設置是8分鍾，如果儀器長時間使用後，除霜8分鍾無法使箱體解凍，可以通過增加除霜時程來解決。箱體手動除霜和樣品頭手動除霜模式可以通過選擇手動除霜鍵來進行(一般不使用)。

　　3 操縱麵板2主要控製電動切片、樣品頭升降、切片厚度和修片厚度。電動切片有三種模式：間歇模式、連續模式和單次模式。電動切片速度可以手動調節，電動切片的開啟和中斷可以手控或者通過腳踏板控製。樣品頭升降主要用來調節樣品和刀片之間的距離，具有粗調和細調兩種模式。

　　4 儀器使用後的操作。日常使用後需進行一些處理：將OT設為0℃，CT設為-10℃,這樣既可以延長壓縮機的壽命又利於除霜過程的進行;取出刀片並進行除菌、幹燥以備下次使用;清除箱體中的切片廢棄物;取出未使用的組織樣本另行保存;鎖定手輪和控製麵板1。長時間不使用儀器可以將總開關關閉，但箱體和所有有關切片的附件均需進行除菌和幹燥處理。

　　5 包埋劑的使用。包埋劑主要用於將組織與樣品台固定在一起，並包被組織以利於展片。包埋劑可選用常見的生理鹽水或PBS等緩衝液，近年來一種混合型包埋劑OCT，使用的越來越廣泛，OCT包埋後，組織切片更加平整。OCT是一種聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物，可以直接用於組織包被，也可以對組織進行切片預處理後再切片。預處理方法：組織浸蔗糖後放入蔗糖與OCT 1:1體積比的混合液中，室溫2小時;放入OCT中室溫4小時(具體時間視組織大小而定)。

　　冰凍切片機使用注意事項

　　1、開機後速凍台溫度非常低，請小心操作勿徒手接觸。

　　2、固定樣品時應將樣品置於包埋盒底部，避免在進行切片時先要進行長時間的修片損壞磨損切片刀。

　　3、使用刷子掃除多餘組織碎片時，請不要刷刀片頂部的刀刃，同時由下到上順著刀麵輕刷。

　　4、切片過程中請將冷凍箱窗口留個小縫即可，不可大敞著口進行切片。

　　5、切片完畢後務必將刀片護刀架放好，將手輪鎖死在12點位置。

　　6、如果切完樣品還有下一位同學需要用的話，可將機器的速凍台和冷凍箱溫度調至-8℃，然後按鎖定鍵，機器即進入待機狀態。

　　7、每次使用完畢一定要將切片機冷凍箱內清理幹淨，保持切片機的整潔。同時填寫《儀器使用記錄》，包括“使用日期、實際使用時間、使用者、機器狀態"。

　　8、如若要對帶有生物危害性的樣品進行切片前，請提前與儀器負責人再進行切片。