激光顯微鏡的優勢

　    激光顯微鏡與(yu) 傳(chuan) 統寬場顯微鏡相比，具有高清晰度、高分辨率、高靈敏度等特點，在生物醫學領域應用廣泛，成為(wei) 了該領域重要的成像工具。為(wei) 什麽(me) 共聚焦能得到如此多的寵愛，它又有哪些優(you) 勢呢？本文列舉(ju) 了三方麵來論述共聚焦的優(you) 勢。

　　隻收集焦平麵上的信號，使圖像由模糊變清晰

　　樣品比較厚的時候，普通寬場熒光顯微鏡隻能夠觀察到整體(ti) 的樣品結構，而共聚焦顯微鏡卻可以展現樣品輪廓及內(nei) 部結構。

　　那麽(me) 共聚焦顯微鏡是如何實現這一優(you) 勢的呢？這就要歸功於(yu) 共聚焦的關(guan) 鍵硬件—針孔（pinhole），如圖二所示，它是檢測器前麵的一個(ge) 小孔，放置在與(yu) 樣品焦麵共軛的光學平麵上。當激發光照射樣品時，焦麵和非焦平麵上的樣品區域都會(hui) 被激發而產(chan) 生熒光信號，調節合適的針孔大小（通常為(wei) 1 Au），使焦麵上的熒光信號（綠色虛線）可以通過針孔到達檢測器，而非焦平麵的熒光信號（紅色和藍色虛線）不能通過針孔到達檢測器。通過增加硬件針孔，使共聚焦在不改變普通熒光顯微鏡的製片方法的前提下，得到了清晰的高質量圖像。

　　可連續獲取不同焦平麵的信號，實現三維重組

　　由於(yu) 針孔的存在，我們(men) 能夠隻獲取到焦平麵上的信號，得到高分辨率的二維圖像。連續調節Z軸位置，就能夠得到不同Z軸位置的二維圖像，獲得一係列連續的“光學切片"圖像。獲得這些光學切片後，可使用儀(yi) 器軟件配備的3D模塊進行三維圖像的重組，構建出清晰的3D圖像。這種無損傷(shang) 的、連續的光學切片圖像的采集，實現了“細胞CT"的功能。

　　應用於(yu) 共定位(Co-localization)研究

　　共定位結果的精準度與(yu) 圖像的分辨率密切相關(guan) ，所以我們(men) 在進行共定位實驗時需要選擇更高分辨率的成像方式。共聚焦顯微鏡相比於(yu) 傳(chuan) 統顯微鏡以其高分辨率的優(you) 勢，成為(wei) 共定位研究的得力工具。

　　由於(yu) 衍射極限的存在，激光顯微鏡常規共聚焦光學分辨率在200nm左右，當我們(men) 需要觀察大於(yu) 200nm的結構時，共聚焦就能夠準確判斷其共定位程度。如果需要進行共定位分析，可以選用共聚焦軟件中配備的共定位分析模塊。