細胞培養技術注意事項

細胞培養(yang) 技術注意事項大匯總:

1. 實驗進行前，無菌室及無菌操作台(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鍾滅菌，以70 %ethanol 擦拭無菌操作抬麵，並開啟無菌操作台風扇運轉10 分鍾後，才開始實驗操作。每次操作隻處理一株細胞株，且即使培養(yang) 基相同亦不共享培養(yang) 基，以避免失誤混淆或細胞間汙染。實驗完畢後，將實驗物品帶出工作台，以70 % ethanol 擦拭無菌操作抬麵。操作間隔應讓無菌操作台運轉10 分鍾以上後，再進行下一個(ge) 細胞株之操作。

2. 無菌操作工作區域應保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置，其它實驗用品用完即應移出，以利於(yu) 氣流之流通。實驗用品以 70 % ethanol 擦拭後才帶入無菌操作台內(nei) 。實驗操作應在抬麵之中央無菌區域，勿在邊緣之非無菌區域操作。

3. 小心取用無菌之實驗物品，避免造成汙染。勿碰觸吸管尖頭部或容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開後，以手夾住瓶蓋並握住瓶身，傾(qing) 斜約45° 角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌麵。

4. 工作人員應注意自身之安全，須穿戴實驗衣及手套後才進行實驗。對於(yu) 來自人類或是病毒感染之細胞株應特別小心操作，並選擇適當等級之無菌操作台(至少 Class II)。操作過程中，應避免引起aerosol 之產(chan) 生，小心毒性藥品，例如DMSO 及TPA 等，並避免尖銳針頭之傷(shang) 害等。

5. 定期檢測下列項目： 5.1. CO2 鋼瓶之CO2壓力 5.2. CO2 培養(yang) 箱之CO2濃度、溫度、及水盤是否有汙染(水盤的水用無菌水，每周更換)。 5.3. 無菌操作台內(nei) 之airflow 壓力，定期更換紫外線燈管及HEPA 過濾膜，預濾網(300小時/預濾網，3000 小時/HEPA)。

6. 水槽可添加消毒劑(Zephrin 1:750)，定期更換水槽的水。

7. 認真按照操作規程進行實驗，一般不大會(hui) 導致汙染，很多情況下是由於(yu) 所用的試劑或培養(yang) 基有汙染而使實驗失敗。

8. 粉末培養(yang) 基配製好後(加了血清)，一般在4度盡量不要超過1個(ge) 月，如在-20度存放時間可長一些，但最好也不要超過3-4個(ge) 月，可能對於(yu) 永生化細胞株來說要求不是太高，但我在過去的4年裏一直是作原代 細胞培養(yang) 的，細胞嬌弱，經驗表明放置時間不宜過長。

9. 關(guan) 於(yu) 實驗用品的清洗與(yu) 消毒，我的經驗是：用過的玻璃器皿先在清水中浸泡30min以上，然後加少許清洗劑，以超聲波洗滌30min左右，(如無超聲波洗滌器可用軟毛刷輕輕刷洗幹淨)，撈出晾幹，再在鉻酸洗液中浸泡6-18h(或過夜)後，自來水清洗10-15遍，雙蒸水清洗3-4遍，晾幹，高壓消毒後即可使用。

10. 許多塑料製品也可以高壓消毒，例如培養(yang) 瓶蓋，膠塞，吸頭等。不能用於(yu) 高壓的一般均已製成一次性作用的商品了，當然如果 money有限，如進口的培養(yang) 板、皿等，也可以重複使用1-2次，我當時使用方法是將其清潔後，使用前在紫外燈下敞開照射1-1.5h即可，我做過多次，沒有出現問題。塑料培養(yang) 瓶由於(yu) 清洗消毒不便，最好不要重複使用，如一定要重複用，可用環氧乙烷等消毒，(消毒後一定要放置半年以上方可使用)。

11. 在光鏡下，上皮細胞通常呈“鋪路石"樣排布，細胞之間有拉絲(si) 現象(即距離較遠的細胞可以通過細長的觸手相連)，細胞有成片生長的特性。而間質細胞通常呈梭形，沒有有成片生長的特性，細胞之間的聯係不緊密。但是細胞的形態特征會(hui) 因為(wei) 生長條件的改變而改變，如HeLa細胞是上皮細胞，但是在酸性培養(yang) 條件下會(hui) 變為(wei) 梭形。